一、服務(wù)簡介

    shRNAs(RNA-ShorthairpinRNAs)：即短發(fā)夾RNA，是能夠形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的非編碼小RNA分子。克隆到載體中的shRNA包括兩個(gè)短的反向重復(fù)序列，中間由一莖環(huán)（loop）序列分隔，組成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，由polⅢ啟動(dòng)子（如人/鼠源的U6啟動(dòng)子和人H1啟動(dòng)子）控制，隨后連上5-6個(gè)T作為polⅢ的轉(zhuǎn)錄終止子。
我們可以根據(jù)靶基因設(shè)計(jì)shRNA，并合成2條互補(bǔ)的、編碼shRNA的DNA單鏈，退火后連接到慢病毒載體的polⅢ 啟動(dòng)子下游。shRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，經(jīng)由細(xì)胞內(nèi)的RNAi通路處理形成siRNA而最終發(fā)揮干擾作用。

二、技術(shù)優(yōu)勢

    1、 用途廣泛，既可被包裝產(chǎn)生shRNA慢病毒，又能以質(zhì)粒形式轉(zhuǎn)染細(xì)胞；
    2、 與化學(xué)合成的siRNA相比，shRNA以質(zhì)粒或病毒形式進(jìn)入細(xì)胞，不易降解，更穩(wěn)定；
    3、 載體多樣，篩選標(biāo)簽種類豐富。

三、服務(wù)內(nèi)容

    1、  設(shè)計(jì)shRNA序列：根據(jù)目的mRNA序列設(shè)計(jì)3條shRNA序列；
    2、  模板合成：合成每條編碼shRNA的單鏈DNA模板，退火形成DNA雙鏈。模板鏈后面連接RNAPolyIII聚合酶轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)，且兩端分別設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)；
    3、  DNA雙鏈和慢病毒載體的連接；
    4、  連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；
    5、  測序驗(yàn)證。


四、服務(wù)須知

服務(wù)項(xiàng)目客戶提供交付產(chǎn)物實(shí)驗(yàn)周期shRNA慢病毒載體構(gòu)建1、靶基因的序列或設(shè)計(jì)好的shRNA序列
2、指定載體1、shRNA慢病毒載體
2、載體圖譜、測序結(jié)果2-3周
五、具體實(shí)驗(yàn)周期及費(fèi)用：請咨詢我司客服人員